慢病毒整合插入位點(diǎn)標準品擴容
發(fā)布時(shí)間:2025/05/30分類(lèi):技術(shù)文章來(lái)源:科佰生物
慢病毒背景
慢病毒載體（Lentiviral vectors, LVs）是在人免疫缺陷病毒HIV-1的基礎上改造而來(lái)的，可以將大量的遺傳信息傳遞進(jìn)宿主細胞，并且整合到細胞的基因組內，使其可以在細胞內穩定表達若干代。同時(shí)，由于它的毒力基因已經(jīng)被剔除，作為假病毒可以在實(shí)驗室內較為安全的使用。慢病毒載體可以轉染多種細胞，包含原代細胞等難轉染的細胞。
慢病毒在Car-T細胞療法中的應用
基于慢病毒具有：
感染范圍廣、效率高，有效感染分裂和非分裂的細胞；
穩定性強，整合進(jìn)基因組中，長(cháng)期穩定表達外源的基因；
免疫原性低，安全性相對較高的特點(diǎn)，慢病毒被廣泛應用于細胞治療中。
CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-cell，嵌合抗原受體T細胞）療法是一種突破性免疫療法，通過(guò)基因改造患者的T細胞，使其表達特定的CAR（嵌合抗原受體），從而識別并殺傷腫瘤細胞。目前主要用于血液系統惡性腫瘤（如B細胞白血病、淋巴瘤），并逐步向實(shí)體瘤拓展。
慢病毒整合的特性
慢病毒是目前CAR-T主流轉導方式（FDA已批準的CAR-T產(chǎn)品中，約90%采用LV），慢病毒整合在細胞內是半隨機整合（偏好轉錄活躍區）。
1
慢病毒通過(guò)識別宿主表面受體，把RNA和蛋白轉運至胞內；
2
病毒RNA逆轉錄形成線(xiàn)性 雙鏈cDNA（含兩端LTR序列）
3
整合酶識別LTR,cDNA被整合到宿主基因組中；
4
外源基因隨宿主細胞分裂持續表達。
整合偏好性：
整合位點(diǎn)分析（Integration Site Analysis, ISA）是基因治療產(chǎn)品（如CAR-T）臨床開(kāi)發(fā)和上市后監測的關(guān)鍵環(huán)節，其法規要求由各國監管機構（如FDA、EMA）制定，旨在評估基因組整合的潛在風(fēng)險（如插入突變、克隆擴增）。
目前檢測ISA的方法有LM-PCR、NGS、單細胞測序等，為了保證檢測的準確性，科佰生物開(kāi)發(fā)了一系列慢病毒整合位點(diǎn)標準品供檢測機構使用，作為品質(zhì)衡量的標尺對檢測能力進(jìn)行判別。在前文 慢病毒整合位點(diǎn)標準品強勢來(lái)襲一文中，已對單克隆多插入位點(diǎn)、單克隆單插入位點(diǎn)、性染色體插入位點(diǎn) 做了產(chǎn)品的說(shuō)明及數據展示。近期科佰推出了5% 2% 整合頻率的慢病毒多克隆多整合位點(diǎn)參考品，由多個(gè)單克隆整合位點(diǎn)產(chǎn)品混合而來(lái)，覆蓋20個(gè)插入位點(diǎn)，分別來(lái)自11個(gè)不同染色體上的20個(gè)基因，如下表所示
Figure 1. 基因分布
Figure 2. 染色體分布
每個(gè)位點(diǎn)經(jīng)過(guò)LM-PCR（用于識別已知DNA與相鄰未知DNA的一種技術(shù)，可結合NGS，對IS進(jìn)行高通量分析）、 NGS（捕獲探針?lè )y序）技術(shù)檢測，Sanger測序驗證，以及dPCR檢測定標整合頻率，確保插入位點(diǎn)的準確定位和整合頻率的精準測量。
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產(chǎn)品列表
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貨號 |
名稱(chēng) |
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慢病毒多克隆多整合位點(diǎn)參考品-5% |
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慢病毒多克隆多整合位點(diǎn)參考品-2% |
部分數據展示
5% chr3：4871944 ITPR1四種檢測結果：
LM-PCR結果
NGS結果
Sanger結果
3'LTR+ITPR1 chr3_4871940
ITPR1 chr3_4871944+5'LTR
dPCR結果
